这种质粒一般是测序质粒之类的载体吧?如果是这样的话这个问题可以用蓝白斑筛选作为参考。
质粒上包含LacZ的alpha片段编码序列及其相关启动子,多克隆位点设计在启动子或者编码区或者它们之间,当没有外源序列的时候,该质粒转入△M15的大肠杆菌中,在IPTG诱导下,大肠杆菌表达omega片段,与质粒表达alpha片段构成有活性的beta半乳糖苷酶,可以分解X-gal成蓝色,这就是蓝色克隆。
当质粒的多克隆位点插入外源序列之后,破坏alpha片段的编码(也有很小几率插入的片段不影响读码框,且编码的融合蛋白仍有alpha片段的活性,这就是假阴性)或者破坏其启动子序列,最终不能形成有活性的beta半乳糖苷酶。这就是白色克隆。
所以回到这个问题,可以认为原本的基因,不能表达或者不能正常表达。
这种质粒一般是测序质粒之类的载体吧?如果是这样的话这个问题可以用蓝白斑筛选作为参考。
质粒上包含LacZ的alpha片段编码序列及其相关启动子,多克隆位点设计在启动子或者编码区或者它们之间,当没有外源序列的时候,该质粒转入△M15的大肠杆菌中,在IPTG诱导下,大肠杆菌表达omega片段,与质粒表达alpha片段构成有活性的beta半乳糖苷酶,可以分解X-gal成蓝色,这就是蓝色克隆。
当质粒的多克隆位点插入外源序列之后,破坏alpha片段的编码(也有很小几率插入的片段不影响读码框,且编码的融合蛋白仍有alpha片段的活性,这就是假阴性)或者破坏其启动子序列,最终不能形成有活性的beta半乳糖苷酶。这就是白色克隆。
所以回到这个问题,可以认为原本的基因,不能表达或者不能正常表达。
这种质粒一般是测序质粒之类的载体吧?如果是这样的话这个问题可以用蓝白斑筛选作为参考。
质粒上包含LacZ的alpha片段编码序列及其相关启动子,多克隆位点设计在启动子或者编码区或者它们之间,当没有外源序列的时候,该质粒转入△M15的大肠杆菌中,在IPTG诱导下,大肠杆菌表达omega片段,与质粒表达alpha片段构成有活性的beta半乳糖苷酶,可以分解X-gal成蓝色,这就是蓝色克隆。
当质粒的多克隆位点插入外源序列之后,破坏alpha片段的编码(也有很小几率插入的片段不影响读码框,且编码的融合蛋白仍有alpha片段的活性,这就是假阴性)或者破坏其启动子序列,最终不能形成有活性的beta半乳糖苷酶。这就是白色克隆。
所以回到这个问题,可以认为原本的基因,不能表达或者不能正常表达。
这种质粒一般是测序质粒之类的载体吧?如果是这样的话这个问题可以用蓝白斑筛选作为参考。
质粒上包含LacZ的alpha片段编码序列及其相关启动子,多克隆位点设计在启动子或者编码区或者它们之间,当没有外源序列的时候,该质粒转入△M15的大肠杆菌中,在IPTG诱导下,大肠杆菌表达omega片段,与质粒表达alpha片段构成有活性的beta半乳糖苷酶,可以分解X-gal成蓝色,这就是蓝色克隆。
当质粒的多克隆位点插入外源序列之后,破坏alpha片段的编码(也有很小几率插入的片段不影响读码框,且编码的融合蛋白仍有alpha片段的活性,这就是假阴性)或者破坏其启动子序列,最终不能形成有活性的beta半乳糖苷酶。这就是白色克隆。
所以回到这个问题,可以认为原本的基因,不能表达或者不能正常表达。